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    固相萃取的工作原理和操作步驟

    • 發表時間2023-02-07
    • 點擊次數956
           固相萃取的基本原理
     
      固相萃取(SPE)是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標化合物吸附,與樣品的基體和干擾化合物分離,然后再用洗脫液洗脫,達到分離和和富集的目的。先使液體樣品通過一裝有吸附劑(固相)小柱,保留其中某些組分,再選用適當的溶劑沖洗雜質,然后用少量溶劑迅速洗脫,從而達到快速分離凈化與濃縮的目的。SPE可以用于所有類型樣品的處理,但是液體樣品是最容易處理的。
     
      固相萃取的分離模式
     
      1.反相固相萃取
     
      -吸附劑(固定相)是非極性或弱極性的,如硅膠鍵合C18,C8,C4,C2,-苯基等。流動相為極性(水溶液)或中等極性樣品基質。
     
      -吸附劑的極性小于洗脫液的極性。
     
      -應用:可以從強極性的溶劑中(如水樣)萃取是非極性或弱極性的化合物。
     
      -作用機理:非極性-非極性相互作用,如范德華力或色散力。
     
      有機溶劑非極性順序:
     
      正己烷>環己烷>四氯化碳>甲苯>苯>無水>氯仿>二氯甲烷>四氫呋喃>乙酸乙酯>丙酮>乙腈>異丙醇>甲醇>水>乙酸
     
      2.正相固相萃取
     
      ·吸附劑:極性鍵合相,如硅膠鍵合-NH2、-CN,-Diol(二醇基);極性吸附劑,如silica florisil、(A-,N-,B-)alumina、硅藻土等。流動相為中等極性到非極性樣品基質。
     
      ·作用機理:
     
      ☆極性-極性相互作用
     
      ☆表面硅羥基、鋁羥基與極性化合物的極性官能團之間相互作用,包括氫鍵,π-π鍵等。
     
      ☆偶極-偶極相互作用
     
      ☆偶極-誘導偶極相互作用
     
      -應用:從非極性溶劑樣品中萃取極性化合物除此之外,還有離子交換萃取和免疫親和兩種分離模式。
     
      固相萃取的操作步驟
     
      一個完整的固相萃取步驟包括固相萃取柱的預理、上樣、洗去干擾物質、洗脫及收集分析物個步驟。
     
      1.固相萃取柱的預處理
     
      ·一是為了潤濕和活化固相萃取填料,二是為了除去填料中可能存在的雜
     
      質,減少污染。
     
      ·采取的方法是用一定量溶劑沖洗萃取柱。
     
      ·反相類型的固相萃取硅膠和非極性吸附劑介質,通常用水溶性有機溶劑如甲醇預處理,然后用水或緩沖溶液替換滯留在柱中的甲醇。
     
      ·正相類型的固相萃取硅膠和極性吸附劑介質,通常用樣品所在的有機溶劑來預處理。
     
      ·離子交換填料一般用3~5mL去離子水或低濃度的離子緩沖溶液來預處理。
     
      ·固相萃取填料從預處理到樣品加入都應保持濕潤,如果在樣品加人之前,萃取柱中的填料干了,需要重復預處理過程。
     
      2.上樣
     
      將樣品倒入活化后的SPE小柱,然后利用加壓、抽真空或離心的方法使樣品進入吸附劑。采取手動或泵以正壓推動或負壓抽吸方式,使液體樣品以適當流速通過固相萃取柱,此時,樣品中的目標萃取物被吸附在固相萃取柱填料上。
     
      3.洗去干擾物質
     
      ·目的是為了除去吸附在固相萃取柱上的少量基體干擾組分。
     
      ·一般選擇中等強度的混合溶劑,盡可能除去基體中的干擾組分,又不會導致目標萃取物流失。
     
      ·反相萃取體系常選用一定比例組成的有機溶劑-水混合液,有機溶劑比例應大于樣品溶液而小于洗脫劑溶液。
     
      4.洗脫及收集分析物
     
      -選擇適當的洗脫溶劑洗脫被分析物,收集洗脫液,揮干溶劑以備后用或直接進行在線分析。-為了盡可能將分析物洗脫,使比分析物吸附更強的雜質留在SPE柱上,需要選擇強度合適的洗脫溶劑。

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